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晶抗生物詳解檢測型特異性抗體
更新時間:2020-03-18   點擊次數(shù):1218次

檢測型特異性抗體基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體( 聚苯乙烯微量反應(yīng)板 )表面,使酶標(biāo)記的抗原-抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。

1、競爭:

此法主要用于測定小分子抗原及半抗原,其原理類似于放射免疫測定。

其基本程序為:

抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干

加入待檢抗原及一定量的酶標(biāo)抗原(對照孔僅加酶標(biāo)抗原)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液

用ELISA試劑盒檢測儀測定OD值。

被結(jié)合的酶標(biāo)抗原的量由酶催化底物反應(yīng)產(chǎn)生有色產(chǎn)物的量來確定,如果待檢溶液中抗原越多,被結(jié)合的標(biāo)記抗原的量就越少,有色產(chǎn)物就減少,這樣根據(jù)有色產(chǎn)物的變化就可求出未知抗原的量。

此法的優(yōu)點在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測;其主要不足在于每種抗原都要進(jìn)行酶標(biāo)記,而且因為抗原的結(jié)構(gòu)不同,還需應(yīng)用不同的結(jié)合方法。此外試驗中應(yīng)用酶標(biāo)抗原的量較多。

2、阻斷

本法主要用于。該方法現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎(TGE)、豬偽狂犬?。≒R)及豬胸膜肺炎(AP)的主要檢測方法。

下面以AP2型抗體的阻斷ELISA試劑盒檢測法為例介紹其操作程序:

① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干

② 用200μl阻斷緩沖液進(jìn)行封閉 → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干

⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液

⑦ 用檢測儀測定OD值。

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