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細(xì)胞分離技術(shù)
更新時(shí)間:2016-11-21   點(diǎn)擊次數(shù):1948次

LCM技能別離細(xì)胞速度較以往辦法有很大進(jìn)步,例如,從腎安排切片中別離一個(gè)腎小球(Glomerulus)所需時(shí)刻小于10秒,一小時(shí)內(nèi)即可輕松地別離上百個(gè)腎小球。
神經(jīng)體系首要由兩類細(xì)胞構(gòu)成:神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞。
在腦內(nèi),不一樣解剖區(qū)域行使不一樣功用,這兒所講的解剖區(qū)域是指核團(tuán)。
美國(guó)國(guó)立健康研討院腫瘤研討所病理研討室與生物醫(yī)學(xué)設(shè)備組協(xié)作研發(fā)激光捕獲顯微切開(kāi)技能,發(fā)展為Acturus 的PixCell II體系。
在操作這套體系時(shí),首要在安排切片上掩蓋一層通明的膜,在顯微鏡下查詢?cè)摪才徘衅?,挑選某一分外細(xì)胞后,打開(kāi)脈沖式紅外激光束,使膜融化變得粘性很強(qiáng)(該膜的成份為 Ethylene Vinyl Acetate Polymer),等到冷卻后將該方位的細(xì)胞牢固地粘附在上面然后別離細(xì)胞。
該種辦法較以往辦法改善的當(dāng)?shù)兀菏滓?jiǎn)略,不需求移動(dòng)任何切片部位,一步即可完畢從安排中別離分外細(xì)胞,這些在膜上的細(xì)胞依然堅(jiān)持其原有的形狀,運(yùn)用無(wú)菌、一次性的膜可zui大極限地防止或許的污染。
因此,假定研討者首要是為了研討很多種基因在特定核團(tuán)的神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)狀況,新的解決方案之一便是組合LCM技能、RNA擴(kuò)增技能和基因芯片技能。
即運(yùn)用LCM技能將特定核團(tuán)的神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞取出,獲取總RNA或mRNA,RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA并進(jìn)行擴(kuò)增.zui終將cDNA標(biāo)記為探針,和基因芯片雜交。
假定研討的基因品種數(shù)不多,那么也能夠只獲取LCM取得的細(xì)胞的總RNA,運(yùn)用定量RT-PCR技能來(lái)進(jìn)行基因表達(dá)剖析。
這關(guān)于后續(xù)進(jìn)行PCR查看是尤為重要的。其次,使膜活化所需的激光能量很?。?lt;50mW),與慣例顯微協(xié)作是滿足的,完夠滿足臨床病理安排細(xì)胞顯微別離的需求。
核團(tuán)在顯微鏡下才能夠區(qū)別,是相對(duì)會(huì)合在一個(gè)區(qū)域的或許行使必定功用的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的集合體。
把某個(gè)核團(tuán)從腦內(nèi)取出來(lái)是不太實(shí)踐的。腦內(nèi)核團(tuán)數(shù)以百計(jì),假定要想研討基因在腦內(nèi)核團(tuán)的表達(dá)水平,在早年只能用原位雜交技能。
假定要想研討蛋白質(zhì)的表達(dá)水平或磷酸化等狀況,只能用免疫安排化學(xué)技能。
而這兩個(gè)技能雖然能準(zhǔn)確定位基因或蛋白質(zhì)在腦內(nèi)核團(tuán)的表達(dá)狀況,缺點(diǎn)是通量小。

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