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ELISA試劑盒直接包被的方法
更新時(shí)間:2017-01-10   點(diǎn)擊次數(shù):1785次

ELISA試劑盒蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附聯(lián)絡(luò)的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。
蛋白質(zhì)抗原大多也可選用與抗體類似的方法包被。
當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí),抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分顯露,在這種情況下,直接包被作用不佳,能夠選用直接的捕獲包被法,即先將對(duì)于該抗原的特異抗體作預(yù)包被,這今后通過抗原抗體反響使抗原固相化。
這種物理吸附對(duì)錯(cuò)特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。
載體對(duì)不一樣蛋白質(zhì)的吸附才干是不相同的,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)一般富含更多的疏水基團(tuán),故更易吸附到固相載體表面。
IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力,其聯(lián)合多發(fā)生在Fc段上,抗體聯(lián)絡(luò)點(diǎn)顯露于外,因此抗體的包被一般均選用直接吸附法。
此直接聯(lián)絡(luò)在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面,其抗原決定簇也得以充分顯露。
ELISA試劑盒直接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大進(jìn)步,因此含雜質(zhì)較多的抗原也可選用捕獲包被法,試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善,重復(fù)性亦佳。
將抗原或抗體固定在進(jìn)程稱為包被(coating)。
包被便是抗原或抗體聯(lián)絡(luò)到固相載體表面的進(jìn)程。
直接包被的另一利益是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100。
抗心磷脂抗體的ELISA試劑一般選用這種包被方法。
不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可選用格外的包被方法。
在查看抗DNA抗體時(shí),需用DNA作為包被抗原,而遍及的固相載體一般不能直接與核酸聯(lián)絡(luò)。
可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時(shí)),以增加其吸附功用。
固相載體先用堿性蛋白質(zhì),如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預(yù)包被,也可進(jìn)步核酸的聯(lián)絡(luò)力。
也可用親和素生物素系統(tǒng)作直接包被,即用親和素先包被載體,然后參與生物素化的DNA,這種包被方法均勻、結(jié)實(shí),已擴(kuò)展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。 
ELISA試劑盒脂類物質(zhì)無法與固相載體聯(lián)絡(luò),可將其在有機(jī)溶劑(例如乙醇)中溶解后參與ELISA板孔中,開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干,待酒精揮發(fā)后,讓脂質(zhì)天然干固在固相表面。

 

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